作者：王兴红*

单位：中国林业科学研究院华北林业实验中心；浙江大学农业与生物技术学院

期刊：华北农学报，2017，（5）：130-135

基金：国家现代农业（柑橘）产业技术体系建设专项资金项目（CARS-27）；中央级公益性科研院所基本科研业务费专项资金项目（CAFYBB2016QA013）

摘要：为了快速区分柑橘黑斑病菌、亚洲柑橘叶点霉菌、首都叶点霉菌和中国柑橘叶点霉菌，在ITS1和18S区域设计了针对柑橘黑斑病菌、首都叶点霉菌和中国柑橘叶点霉菌的上游引物，以ITS4作为下游引物，并对所设计引物的特异性和退火温度进行了筛选，对引物的灵敏度进行了验证，并进行了果园疑似病斑的检测。结果表明，在退火温度为60℃时，引物Pc1/ITS4仅能从柑橘黑斑病菌中扩增出593bp的特异性条带，引物Pct4/ITS4仅能从首都叶点霉菌中扩增出551bp的条带，引物Pcc1/ITS4仅能从中国柑橘叶点霉菌中扩增出706bp的条带，不能从柑橘常见病害病原菌中扩增出任何条带。特异性引物的灵敏度检测结果表明，引物Pc1/ITS4和Pct4/ITS4的检测灵敏度为200pg，引物Pcc1/ITS4的检测灵敏度为20pg。筛选的特异性引物Pc1/ITS4可以对果园疑似柑橘黑斑病病斑进行检测。因此，利用设计的特异性引物Pc1/ITS4、Pct4/ITS4和Pcc1/ITS4，结合简单的病原菌基因组DNA提取方法，可以在短时间内完成对病原菌的分子检测。

关键词：柑橘黑斑病；柑橘黑斑病菌；中国柑橘叶点霉菌；首都叶点霉菌；特异性引物